ОЦЕНКА АНТИРАДИКАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ АЦЕЛИЗИНА В КОМБИНАЦИИ С ТИОТРИАЗОЛИНОМ НА МОДЕЛИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

Луганский государственный медицинский университет

Многочисленными исследованиями [1—3, 8, 9] доказано, что особую опасность для организма, в плане повреждения клеточных и субклеточных мембран, представляют химические реакции, способные к самоускорению после их инициирования. К таким реакциям относится, прежде всего, свободнорадикальное аутоокисление фосфолипидов. Процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) лежат в основе структурно-функциональных изменений в органах и тканях при многих патологических состояниях, в том числе и при синдроме эндогенной интоксикации (СЭИ) различного генеза [4].

Биохемилюминисценция (БХЛ) — один из многих методов исследования, позволяющий быстро и адекватно оценить интенсивность процессов липидпереокисления и окислительного гомеостаза организма в целом. Этот метод имеет ряд преимуществ перед другими, существующими в практической медицине. Сверхслабое свечение биосубстратов возникает при взаимодействии свободных радикалов, поэтому их низкая стационарная концентрация меньше сказывается на чувствительности метода. Кроме того, для регистрации свечения не требуются специальные и длительные процедуры подготовки биологического материала к исследованию, а низкую интенсивность сверхслабого свечения можно повысить добавлением перекиси водорода [6].

Цель исследования — провести сравнительную хемилюминометрию сыворотки крови животных на модели СЭИ при использовании ацелизина в комбинации с тиотриазолином.

Материалы и методы исследования

Исследования выполнены на половозрелых белых крысах линии "Вистар" обоего пола массой 160—200 г. Экспериментальной моделью служил патологический процесс, развивающийся у животных при разлитом каловом перитоните — под общей анестезией (1% раствор тиопентал натрия внутрибрюшинно в дозе 70 мг/кг) осуществляли лапаротомию, перфорировали толстый кишечник иглой Дюфо, а затем послойно ушивали переднюю брюшную стенку.

Исследование проводили на 5 группах животных. Первую группу составляли интактные крысы; вторую — ложнооперированые животные (лапаротомия без перфорации кишечника), третью (контроль) — крысы с перфорированным толстым кишечником без лечения; четвертую — животные, которым с лечебно-профилактической целью внутрибрюшинно вводили пентоксифиллин (препарат сравнения) в дозе 125 мг/кг за 70 мин до оперативного вмешательства, пятую — крысы, которым за 70 мин до начала моделирования эндотоксикоза с лечебно-профилактической целью вводили внутрибрюшинно ацелизин в комбинации с тиотриазолином в дозах 43,5 мг/кг и 67,9 мг/кг, соответственно.

Интенсивность течения свободнорадикальных процессов оценивали методом БХЛ на приборе Emilite-1105 фирмы "Био Хим Мак" австро-германо-российского производства. Спектральный диапазон прибора — 350—950 нм, диапазон измерений — 103—1010 фотон/с. Для индукции свободнорадикальных процессов использовали 3% раствор перекиси водорода по методу, описанному Е.П. Сидориком и соавт. [5], в модификации [6]. Оценивали следующие параметры БХЛ: амплитуду быстрой вспышки (I₁); амплитуду конечного значения интенсивности хемилюминисценции через 5 мин после введения перекиси водорода в кювету (I_к); светосумму реакции (S). Расчет показателей проводили при помощи специально разработанной Д.С. Кравцом программе для компьютера на базе процессора Intel Pentium-II-450 MHz.

В работе использовали сыворотку крови и гомогенат печени, образцы которых готовили на льду с применением охлажденного (4°С) изотонического раствора натрия хлорида. Все исследования выполняли в динамике: через 3, 6 и 24 ч после оперативного вмешательства.

Полученные результаты обрабатывали статистически на персональном компьютере с использованием стандартного пакета программ "Mathematica V. 5.0", "SigmaStat", оценивая достоверность на основании критерия "t" Стьюдента [7].

Результаты и их обсуждение

У животных с СЭИ, развивающемся на фоне разлитого калового перитонита, наблюдается существенное повышение интенсивности свободнорадикальных реакций при одновременном снижении уровня и активности основных компонентов антиоксидантной системы (АОС) защиты организма (таблица).

Уже с самых ранних сроков токсикоза (через 3 ч), показатели амплитуды быстрой вспышки БХЛ (I₁), отражающей интенсивность свободнорадикального ПОЛ, имеют достоверные отличия от таковых у интактных животных. Через 6 ч с момента моделирования СЭИ отмечается выраженное повышение интенсивности генерации свободных радикалов, когда изучаемый показатель в контрольной группе животных превышает таковой у ложнооперированных и интактных крыс в 1,5 и 1,7 раза, соответственно. Интенсивность сверхслабого свечения через 24 ч в группе животных, не получавших лечения (контроль), была в 2 разa выше в сравнении с животными 1-й и 5-й групп (интактные и ложнооперированные).

Пентоксифиллин реализует свои антирадикальные свойства уже через 3 ч наблюдения, когда интенсивность быстрой вспышки БХЛ ниже таковой в контроле, в среднем на 38%. Через 6 ч, когда в контрольной группе крыс отмечается нарастание интенсивности сверхслабого свечения, у животных 3-й группы этот показатель остается на стабильно низком уровне.

И даже через 24 ч наблюдения I₁ в группе животных, получавших пентоксифиллин, ниже такового в контроле в 1,4 раза.

Эффективность ацелизина в комбинации с титриазолином на изучаемой модели СЭИ проявляется через 3 ч и 6 ч — интенсивность сверхслабого свечения (I₁) на 46% и 54% ниже таковых в контроле. К концу первых суток исследования у этих животных отмечается практически двухкратное снижение амплитуды I₁ на хемилюминограммах.

Сравнительный анализ фармакотерапевтической эффективности пентоксифиллина и ацелизина в комбинации с тиотриазолином свидетельствует о более выраженной эффективности комбинируемых лекарственных средств, как препаратов антиоксидантного и антирадикального типа действия при развитии токсикоза эндогенного происхождения (см. табл.). Особенно это проявляется в поздние сроки наблюдения (через 6 ч, 24 ч), когда выявленные различия носят достоверный характер, что имеет важное практическое значение, так как именно с течением времени отмечается утяжеление состояния животных с моделируемой формой эндогенной интоксикации.

Конечное значение интенсивности сверхслабого свечения на фоне разлитого калового перитонита (контроль) имеет тенденцию к росту, практически во все сроки наблюдения. В группе животных, получавших пентоксифиллин, значение I_k через 24 ч ниже, чем в контроле в 1,5 раза.

На фоне лечебно-профилактического применения ацелизина в комбинации с тиотриазолином I_k через 3 ч на 45% и 73% ниже такового у интактных и контрольных крыс, соответственно.

Из таблицы видно, что у крыс контрольной группы имеет место тенденция к возрастанию светосуммы через 24 ч по сравнению с интактными и ложнооперированными животными (на 90% и 73%).

На фоне монотерапии пентоксифиллином через 6 ч показатель светосуммы значительно снижался по отношению к контрольным животным и не отличался от такового у интактных крыс.

Наиболее выраженный эффект получен у животных на фоне комбинированного применения ацелизина с титриазолином, где уже в начале исследования (через 3 ч послеоперационного периода) изучаемый показатель в 1,5 раза ниже, чем у интактных животных. Эффект изучаемой комбинации существенно превосходит таковой для препарата сравнения, что реализуется уже через 3 ч наблюдения, когда показатель светосуммы в группе животных, получавших ацелизин в комбинации с тиотриазолином с лечебно-профилактической целью, на 49% меньше, чем в группе животных, получавших пентоксифиллин. В более поздние сроки развития СЭИ, к 24-м часам наблюдения, изучаемый показатель остается существенно ниже такового как в контроле, так и у крыс, получавших с лечебно-профилактической целью пентоксифиллин.

Таким образом, полученные результаты позволяют утверждать, что при токсикозе эндогенного происхождения происходит сдвиг окислительного гомеостаза организма в сторону интенсификации образования и накопления прооксидантов при одновременном повышении расходования эндогенных антиоксидантов на нейтрализацию образовавшихся в чрезмерном количестве продуктов ПОЛ.

Полученные результаты свидетельствуют о способности комбинации ацелизина с тиотриазолином угнетать процессы генерации свободных радикалов, предупреждая, таким образом, окислительный стресс в целом, что, в конечном итоге, реализуется высокой выживаемостью животных при данном патологическом состоянии.

Литература
1. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов (молекулярные механизмы, пути повреждения и лечения). —М.: Медицина, 1989. —368 с.
2. Hirayama O., Yida M. Evaluation of hydroxyl radical —scavenging ability by chemiluminescense // Anal. Biochem. —1997. —V. 251, N2. —P. 297—299.
3. Hess M.L., Manson N.H. The role of the oxygen free radical system in the calcium paradox, the oxygen paradox and ischemia/reperfusion injury // J. Moll. Cell. Cardiol. —1984. —N16. —P. 969—985.
4. Савченкова Л.В., Семенова І.О., Січанова О.В. // Матеріали ІV Конгресу світової федерації Українських лікарських товариств. —Одеса, 1996. —С. 235.
5. Сидорик Е.П., Баглей Е.А., Данко М.И. Биохемилюминисценция клеток при опухолевом процессе. —К.: Наукова думка, 1989. —220 с.
6. Методические рекомендации по использованию метода биохемилюминисценции в фармакологии / Под ред. В.Д. Лукьянчука. —Луганск, 1997. —18 с.
7. Методы определения токсичности и опасности химических веществ / Под ред. И.В. Саноцкого. —М: Медицина, 1970. —343 с.
8. Сергеев П.В., Белых А.Г., Чукаев С.А. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку Fe2+-индуцированной хемилюминисценции // Эксперим. и клин. фармакология. —1992. —№2. —С. 60—62.
9. Jwaoka T., Tabata F. Chemiluminescent detection of superoxide in vitro and reaction of antilipid peroxidative drug with superoxide genetated electrochemically // Oxygen Chem. And Biochem. —Amsterdam, 1988. —P. 461—464.

| Зміст |