ПРИОРИТЕТНЫЕ АСПЕКТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

Институт медицины труда АМН Украины,
Институт экогигиены и токсикологии им. Л.И. Медведя, г. Киев

Широкое использование известных (генерики), а также разработка новых оригинальных лекарственных препаратов (ЛП) обуславливает необходимость обязательной доклинической оценки как их специфической фармакологической активности, так и токсических свойств. При этом оценка риска возникновения токсических проявлений на основании экспериментальных исследований предусматривает не только изучение общетоксических свойств, вызванных химическим строением действующих веществ ЛП, но и возможного аллергенного, иммуннотоксического действия, отдаленных эффектов (мутагенного, канцерогенного, эмбриотоксического, нейротоксического), выявление "дозо-время-независимых эффектов".

Необходимо учитывать, что побочные эффекты ЛП могут возникать на фоне генетических аномалий организма, его патологических состояний (сахарный диабет, хроническая недостаточность печени и почек и др.).

Современные подходы к оценке токсических свойств ЛП (острая, субхроническая, хроническая токсичность) требуют, в первую очередь, проведения комплексной программы, строгой регламентации и формализации условий, объема и длительности проведения эксперимента (согласно утвержденным МОЗ Украины "Методическим рекомендациям" [1—3]), оценки адекватности и надежности используемых методов и моделей, а также обязательного контроля качества и объективности полученных результатов.

В последнее время в современной токсикологической практике наряду с традиционными широкое распространение получили альтернативные методы исследования — концепция трех R (reduction, refinement, replacement: снижение, уточнение, замена) [4-6].

К альтернативным методам относятся: использование беспозвоночных организмов, растений, микроорганизмов, эмбрионального и личиночного материала, культур клеток, математического моделирования, применение ряда физических и химических методов.

Всемирная организация здравоохранения, Международные медико-биологические общества не только одобряют, но и настоятельно рекомендуют и поддерживают использование альтернативных методов [7].

Применение биологических моделей (in vitro) перспективно при скрининге мутагенов и канцерогенов, установлении степени токсичности новых химических веществ, готовых форм и отдельных компонентов лекарственных средств, консервантов, изделий медицинского назначения и др.

Обоснованы рекомендации по определению указанными методами ряда параметров в токсикологии: корреляции СL₅₀, бактерицидного эффекта с DL₅₀, проведение расчетных способов установления средних смертельных доз при различных путях поступления исследуемых веществ в организм [8].

Основными предпосылками для более широкого внедрения в практику доклинических токсикологических исследований альтернативных методов, в том числе методов клеточных культур — модельных тест-систем, являются этические соображения об исключении или ограничении экспериментов на теплокровных животных.

В 2001 г. в Киеве состоялся украинско-американский семинар по вопросам биоэтики, целью которого был обмен опытом и ознакомление украинских специалистов с международными этическими принципами и законодательством биомедицинских и клинико-фармакологических исследований. Особое внимание было уделено вопросам этики работы с экспериментальными животными, клиническим испытаниям лекарственных средств, экологии, антиэтичной сущности "нетрадиционного лечения" и др. [32, 33]. В решениях конгресса отражена необходимость срочного принятия Верховным Советом Украины Закона о биоэтике и биоэтической экспертизе, а также об образовании национального комитета по биоэтике. Обсужден проект Кодекса украинского врача и принят документ "Общие этические принципы работы с экспериментальными животными при проведении медицинских и биологических исследований".

Положительными сторонами системы альтернативной оценки in vitro также являются ее экономичность, возможность проводить исследования на культуре клеток человека, высокая степень воспроизводимости результатов опытов и оперативность в получении информации.

В руководстве по краткосрочным тестам, изданном ВОЗ, подчеркивается, что вот уже более ста лет культура клеток разного происхождения и вида успешно используется в медико-биологических исследованиях. Значимость этого метода при установлении токсичности исследуемых химических веществ и биологических соединений как подтверждающего дополнительные и комплементарные тесты.

Альтернативным методам исследования были посвящены 2-ой и 3-ий Всемирные конгрессы, состявшиеся в 1996 и 1999 гг. в Нидерландах [4—5]. Эти вопросы также широко обсуждались и на ЕВРОТОКСЕ 2001 в Стамбуле [34].

На последнем научном съезде токсикологов России, состоявшемся в конце девяностых годов, проблеме альтернативных методов исследования была целиком посвящена тематика заседаний одной из четырех секций: "Альтернативные методы исследования и механизмы токсического действия". Там же были рассмотрены отдельные аспекты этой проблемы применительно к лекарственной токсикологии [6].

Приведены данные, свидетельствующие о высоких коэффициентах корреляции (более 0,7) и достаточной достоверности результатов (p<0,05) при определении зависимости между результатами, полученными на простых моделях, и величинами DL₅₀, полученными в опытах на лабораторных животных. Чтобы уменьшить вероятность ошибки прогноза токсичности следует проводить тестирование исследуемых препаратов одновременно на нескольких простых моделях. В теории и практике доклинических токсикологических исследований безопасности различных химических веществ (в том числе и лекарственных средств) перспективным также является использование таких экспресс-методов как цитотоксичность, в частности на культуре лимфоцитов человека, тест Эймса на бактериальных культурах, тест на повреждение ДНК, определение микроядер в клетках костного мозга мышей и др.

Величина острой токсичности может оцениваться в сравнении с данными токсикометрических характеристик — ЛК₅₀ (экспозиция 24 ч) ряда известных лекарственных средств в ряду, близком к исследуемым на дафниях, мышах и др. биомоделях. При этом нередко обнаруживается более высокая чувствительность к испытываемым лекарственным средствам мышей (до 10 и более раз) по сравнению с дафниями.

В качестве простых биомоделей можно рекомендовать также и использование дрожжей, парамеций и Е. coli, на которых регистрируются подвижность, хемотаксис, метаболическая активность, интенсивность размножения — как показатели степени токсичности исследуемых веществ.

Приведены данные о перспективности использования альтернативных методов при изучении острого раздражающего действия препаратов с использованием кожи свиньи или мыши [35].

При определении токсичности с помощью простых моделей имеются отдельные вещества или группы веществ, для которых прогнозируемые величины DL₅₀ значительно отличаются от установленных в эксперименте на млекопитающих. Поэтому необходимо формулировать показания и противопоказания к использованию того или иного альтернативного метода.

На современном этапе возможным практическим решением этой проблемы может быть тестирование веществ на нескольких простых моделях одновременно, что позволяет значительно уменьшить вероятность ошибки прогноза токсичности.

Одной из причин развития патологии химической этиологии, в том числе лекарственных средств, является их возможное влияние на структуру и функциональное состояние биологических мембран. В этой связи одной из важных проблем современной токсикологии является оценка селективного мембранотоксического действия уже известных и впервые синтезированных препаратов еще на стадии их экспериментального изучения.

Исследование токсического действия химических веществ на биологические мембраны в опытах in vivo является сложным и трудоемким процессом. Поэтому в современной биологии при скрининге мембранотоксического действия биологически активных веществ в опытах in vitro широко используются плоские искуственные фосфолипидные мембраны (ИФМ) на основе пористых носителей и модельной 2-х фазной водно-липидной системы [14]. Как известно, близкой к простой модели мембран являются эритроциты. Унификация методов мембраноповреждающего действия химических веществ даст возможность сопоставления зависимости "структура-эффект" различных классов химических соединений и экстраполяции данных на человека, что имеет важное токсиколого-гигиеническое значение.

Исследованиями, проведенными П.Г. Жминько [15] при использовании 22 препаратов, установлено, что эти соединения способны накапливаться и взаимодействовать с фосфолипидами ИФМ. При этом степень взаимодействия веществ с границей раздела фаз "липид-вода" зависит от концентрации и их химической структуры.

В условиях in vitro на мембранах эритроцитов крыс показано, что исследованные препараты проявляют более выраженное мембранотоксическое действие по сравнению с действием ФОС [16]. Важно, что выявленные эффекты в опытах на ИФМ и мембранах эритроцитов в условиях in vitro согласуются с таковыми in vivo. Это позволяет использовать модель искусcтвенных фосфолипидных мембран для скрининга мембранотоксического действия химических соединений.

Нами усовершенствована и апробирована [9, 11, 12] экспериментальная модель (in vitro) для оценки и прогнозирования отдаленного нейротоксического действия (ОНД). Последнее, как известно, присуще ряду фосфорорганических соединений (ФОС): триортокрезилфосфату, мипафоксу, лептофосу, афосу и др. Этот эффект проявляется постепенно, после определенного латентного периода (обычно через 14—21 день после перенесенного острого отравления) и характеризуется возникновением атаксии, парезов и параличей конечностей. При морфологическом исследовании выявляется демиелинизация волокон проводящих путей спинного мозга и периферических нервов. Ферментативной мишенью нейропаралитических ФОС (пластификаторы, пестициды) является специфический белок, локализованный в нервной ткани — так называемая "нейротоксическая" (нейропатическая) эстераза (НТЭ). Схожесть гистопатологических изменений, а также однотипное влияние ФОС на НТЭ людей и кур позволяет использовать птиц для экспериментального моделирования нейропатий. Было показано, что ФОС, обладающие ОНД, почти полностью (на 80—90%) ингибируют НТЭ в головном и спинном мозге птиц (в опытах in vitro и in vivo) уже в первые часы их воздействия в токсических дозах [10].

Было впервые установлено однонаправленное влияние ФОС на НТЭ головного мозга не только самых чувствительных к этому эффекту животных — кур, но и морских свинок и даже крыс [12].

Как видно из таблицы процент ингибирования НТЭ (в опытах in vivo) при воздействии триортокрезилфосфата (ТОКФ), афоса, лептофоса в токсических дозах составляет у всех используемых в эксперименте животных 84,5—90%. Важно, что эта же закономерность сохраняется и при использовании также головного мозга животных в опытах in vitro.

Весьма показательно, что угнетение НТЭ в головном мозге человека (секционный материал) и указанных видов животных (опыты in vitro) носит однонаправленный характер, что важно для экстраполяции полученных в эксперименте данных на человека [11].

На модели отравления кур афосом впервые было установлено однотипное влияние яда на активность НТЭ в головном мозге животных и лимфоцитах периферической крови человека, что может быть использовано для мониторинга воздействия нейропаралитических препаратов в натурных условиях [13].

Вместе с тем, при проведении токсикологических исследований не всегда прослеживаются однонаправленные изменения показателей в опытах in vitro и in vivo, что необходимо учитывать при доклиническом изучении различных химических веществ, в том числе и лекарств.

Так, на примере исследования антихолинэстеразной активности триазофоса и ТОКФ (рисунок) было показано, что оба ФОС при введении в зоб курам в токсических дозах практически полностью ингибируют активность холинэстеразы в плазме: угнетение фермента через 48—72 ч после введения препаратов составляет 92, 85% соответственно.

Вместе с тем, в опытах in vitro эта закономерность сохраняется только при использовании триазофоса. При этом угнетение активности фермента в плазме крови кур и крыс составляет соответственно 56, 75%. В то же время использование ТОКФ (10^-4 м) не оказывает существенного влияния на активность холинэстеразы в плазме крыс и морских свинок.

Этот эффект, по всей вероятности, обусловлен тем, что метаболизм ТОКФ в организме животных протекает с образованием более токсичного циклического соединения о-полициклосалегининфосфата, обладающего выраженным антихолинэстеразным действием.

Таким образом, при проведении токсикологического исследования необходимо учитывать, что только комплексное использование методов in vivo и in vitro позволяет наиболее полно оценивать степень опасности препарата.

В последнее время в токсикологической практике для установления потенциальной опасности химических веществ изучается возможность прогнозирования связи структуры ксенобиотиков с их биологической активностью с помощью формирования баз данных и их анализа. Так, при прогнозировании таких отдаленных эффектов, как эмбриотропный и мутагенный, точность прогнозирования классов опасности составляет 78,5% [17].

Разработка аналитических систем с использованием баз данных, касающихся зависимости "структура-билогическая активность", позволяет прогнозировать спектр биологической активности вещества по их структурной формуле. Точность прогноза при этом составляет свыше 83%, что позволяет планировать направленное экспериментальное исследование биологического действия вещества.

Таким образом, проблема внедрения альтернативных методов изучения токсичности и безопасности различных химических препаратов, в том числе и лекарственных средств, в систему доклинических испытаний остается актуальной, но вместе с тем еще далеко незавершенной.

Необходимо учитывать, что наука не приемлет безоговорочно термин "альтернатива" в методических и методологических подходах к изучению любого явления в природе. Из истории науки известно, что "альтернативные" подходы в решении научных проблем в ряде случаев даже приводили к тупиковой ситуации или ложным выводам. Наглядно это можно продемонстрировать на примере "гуморальной теории патологии", "клеточной теории в патологии Вирхова" и "теории нервизма" И.П. Павлова. В физике таким примером является борьба квантовой и волновой теории света. И именно физик Нильс Бор пришел к мысли, "что всякое истинно глубокое явление в природе не может быть определено однозначно...", т.е на основе альтернативных идей или методов познания. В результате тщательного анализа физических исследований того времени им был сформулирован "принцип дополнительности". Это одна из самых глубоких философских и естественнонаучных идей нашего времени, которая вне физики заложена еще в древности.

Уместно особо отметить, что отечественная токсикология всегда развивалась в соответствии с указанным выше принципом, при котором сведения о биологической активности яда в зависимости от поставленных задач получали, как правило, только на основе комплексных, т.е. дополнительных исследований: математического моделирования, токсикометрических исследований на разных видах животных и разных уровнях оранизации биологической системы, с различной экспозицией, исследованием токсикокинетики, метаболических превращений и механизма действия и разработкой на их основе методов диагностики и лечения возможных отравлений. Именно такой подход дает возможность наиболее точно устанавливать минимальный риск острых и хронических отравлений при воздействии химических веществ [18].

Приоритетным направлением в лекарственной токсикологии является разработка новых лекарственных форм с менее выраженными или отсутствующими побочными эффектами. Так, на примере совместного использования ненаркотического анальгетика парацетомола и композиции "Метавит", в состав которой наряду с известным антидотом метионином входят витамины и микроэлементы, экспериментально обоснована возможность оказывать целенаправленное влияние на процессы метаболической активации данного ЛП, что приводит к существенному понижению его гепатотоксического действия [19].

Важным преимуществом отечественного реактиватора холинэстеразы перед зарубежными оксимами (2 ПАМ, ТМБ-4) является его значительно меньшая токсичность (величина ЛД₅₀ при однократном внутримышечном введении крысам составляет соответственно 850 мг/кг и 150 мг/кг), а также отсутствие у препарата побочного действия на функциональное состояние печени, нервную и сердечно-сосудистую системы [20].

Актуальной проблемой лекарственной токсикологии является развитие исследований по фармакокинетике (биоэквивалентности) отечественных лекарственных препаратов. Заслуживает пристального внимания и комбинированное применение ЛП различной химической структуры, а также использование в качестве вспомогательных веществ красителей.

Самостоятельной и весьма сложной проблемой является установление безопасных уровней содержания химических веществ, предназначаемых в качестве лекарственных препаратов, еще на этапе их лабораторного синтеза и последующего производства с целью регламентирования препаратов в воздухе рабочей зоны. Принципиальные подходы при этом не должны отличаться от общей методологии установления ПДК потенциально токсичных веществ, но при этом следует учитывать ряд особенностей. Последние определяются не только специфическими свойствами той или иной группы исследуемых веществ, но и условиями их промышленного производства (объем продукции, ее агрегатное состояние, периодичность выпуска, возможность и масштабы поступления в зону дыхания работающих летучих компонентов и аэрозолей, температурный фактор и др.).

Здесь уместно особо подчеркнуть, что промышленное производство лекарственных средств, которые являются биологически активными веществами, диктует необходимость эффективной профилактики неблагоприятного воздействия их не только на организм работающих, но и население и окружающую среду. Отсюда задача токсикологической оценки новых химических соединений, загрязняющих внешнюю среду в условиях химико-фармацевтического производства, в целях последующего обоснования гигиенических нормативов их допустимого содержания в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе и воде водоемов. При этом следует иметь в виду, что для химико-фармацевтического производства характерной особенностью является наличие широкого ассортимента как исходного сырья и промежуточных продуктов, так и конечных продуктов промышленного синтеза, т.е. собственно лекарственных средств. На этих предприятиях, где работающие могут подвергаться неблагоприятному воздействию химических веществ, среди которых, кроме упомянутых выше, и побочные и вспомогательные продукты, должны регламентироваться не только гигиенические нормативы, но и аналитические методы определения содержания соответствующих веществ в объектах внешней среды. Что же следует изучать в первую очередь при токсикологическом обосновании предельнодопустимых концентраций (ПДК) или ориентировочно безопасных уровней воздействия (ОБУВ) вредных веществ применительно к химико-фармацевтическому производству? Какие показатели должны быть приняты во внимание? Перечислим наболее существенные из числа тех, которые рекомендуются методическими указаниями, разработанными Всероссийским научным центром по безопасности биологически активных веществ и согласуются с опытом наших предшествующих наблюдений [21, 22]. Это прежде всего данные об избирательности фармакологического действия исследуемых веществ, диапазоне их фармакологических эффектов и величин терапевтических доз, преимущественном агрегатном состоянии и степени стабильности, способности активно изменять органолептические свойства воздуха и воды. Необходимы самые подробные сведения, касающиеся химического строения и физико-химических свойств исследуемых компонентов, а также их принадлежности к структурному химическому ряду — для использования информации о близких по строению веществ. Должны быть четко определены пути и способы введения, адекватные методы и тесты для токсикологического исследования и обоснования пороговых уровней. При этом следует предусмотреть как методы интегральные, т.е такие, которые отражают общетоксическое действие на органы и системы, так и специфические (патогенетические), отражающие особенности механизма фармакологических и токсических эффектов.

Особое внимание следует придавать определению кумулятивных свойств, для чего необходимо руководствоваться разработанными нами методическими рекомендациями "Изучение кумулятивных свойств при доклинических исследованиях" [23], а также материалами, ранее опубликованными в руководствах и периодических изданиях [24—28].

В процессе постановки экспериментальных токсикологических исследований, результаты которых должны быть использованы при обосновании соответствующих ПДК и ОБУВ лекарственных средств, следует руководствоваться методическими рекомендациями "Экспериментальное изучение токсического действия потенциальных лекарственных средств" [1], а также руководствами: "Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей" [29], "Проблема нормы в токсикологии" [30]. При этом основная информация касается методов изучения в условиях эксперимента острой токсичности, токсичности при повторных введениях, статистической обработке и экстраполяции полученных данных.

В заключение следует особо отметить оправданность и перспективность ускоренного установления безопасных уровней содержания лекарственных средств в различных объектах внешней среды на основе корреляционно-регрессивного анализа связей между параметрами токсикометрии, суточными терапевтическими дозами исследуемых препаратов и безопасными уровнями их содержания в указанных средах.

Одной из приоритетных проблем современной лекарственной токсикологии является также установление риска комбинированного применения лекарственных средств [31]. Решение этой задачи диктует необходимость при наличии комбинаций активных лекарственных субстанций проводить изучение острой токсичности, в результате которого должно быть установлено либо отсутствие усиления токсического эффекта либо его наличие или возникновение новых неблагоприятных эффектов. При выявлении в условиях эксперимента явления потенцирования или возникновения новых токсических эффектов должны быть предприняты дальнейшие исследования с участием как разработчиков новых композиций, так и экспериментаторов — токсикологов в целях изменения предлагаемой композиции. В каждом подобном случае совместно должна быть проведена оценка соотношения польза-риск.

Из приведенных выше материалов и высказанных соображений представляется очевидной необходимость дальнейшей разработки принципов и методов лекарственной токсикологии, освещения на разных этапах ее совершенствования приоритетных аспектов изучения безопасности современных лекарственных средств.

Литература
1. Методичні рекомендації по експериментальному вивченню токсичної дії потенційних лікарських засобів / В.М. Коваленко, О.В. Стефанов, Ю.М. Максимов, І.М. Трахтенберг. —Київ: МОЗ України, Державний фармакологічний центр, 2000. —43 с.
2. Методичні рекомендації по вивченню канцерогенних властивостей нових речовин та лікарських засобів / В.Ф. Чехун, Г.І. Кулік, Н.І. Шарикіна та ін. —К.: МОЗ України, Державний фармакологічний центр, 2001. —19 с.
3. Доклінічні дослідження лікарських засобів / Методичні рекомендації. —За ред О.В. Стефанова. —Київ: МОЗ України, Державний фармакологічний центр, 2001. —527 с.
4. АTLA Alternotives to laboratory Animals // Second World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences. 20—26 October, 1996. —Urecht, The Netherlands Programme and Abstracts. 1996. —349 р.
5. АTLA Alternotives to laboratory Animals // Third World Congress on Alternatives and Animal Use in the Life Sciences. 29 August—2 September, 1999. —Bologna, Italy. —Urecht, Programme and Abstracts. —442 р.
6. Первый съезд токсикологов России / Тезисы докладов. —М., 1998. —339 с.
7. Дядищев Н.Р., Рыбалкин С.П., Марченко А.И. Биологические модели in vitro в токсикологии. // В кн: 1-ый съезд токсикологов России. Тезисы докладов —М., 1988. —С. 299.
8. Березовская И.В., Иванова В.М., Спасский Ю.А.. Альтернативные методы в лекарственной токсикологии в настоящем и будующем // Там же. —С. 269.
9. Кокшарева Н.В., Каган Ю.С. Ткаченко И.И. Воздействие фосфорорганических соединений, обладающих отдаленной нейротоксичностью // Гигиена и санитария. —1988. —N10. —С. 83—84.
10. Johnson M.K. Irreversible phosphorylathion of brain neurotoxic esterase // Neurobiol. Cholinerg. and Adrenerg. Transmitters. —Busel e.a., 1980. —Р. 99—105.
11. Кокшарева Н.В. Проблема нейротоксического действия фосфорорганических соединений замедленного типа // Актуальні проблеми екогігієни і токсикології. Матеріали науково-практичної конференції. —Київ, 1998. —С. 130—136.
12. Каган Ю.С., Кокшарева Н.В., Ткаченко И.И. Прогнозирование отдаленного нейротоксического действия фосфорорганических соединений // Токсикол. вестник. —1995. —N2. —С. 21—24.
13. Ткаченко И.И., Кокшарева Н.В., Зинченко Д.В., Каган Ю.С. Определение активности нейротоксической эстеразы в лимфоцитах периферической крови для оценки действия фосфорорганических соединений // Врачебное дело. —1989. —N9. —С. 107—109.
14. Гулевский А.К., Бондаренко В.А., Белоус А.М. Барьерные свойства биомембран при низких температурах. —Киев: Наукова думка, 1988. —208 с.
15. Жминько П.Г., Войцицкий В.М., Каган Ю.С., Дубовенко Е.А. Влияние некоторых фосфорорганических пестицидов на характеристики 2-фазной водно-липидной системы // В кн.: Актуальные вопросы токсикологии, гигиены применения пестицидов и полимерных материалов в народном хозяйстве. —Киев, 1990. —С. 100.
16. Kagan Yu.S., Leonenko O.B., Avramenko V.G. // Archives of Complex Environmental Studies. —1995, —V. 8. —N3-4. —P. 57—66.
17. Пушной Г.В., К.П.Базарин, Д.А.Россиев и др. Математическое и нейросетевое моделирование эмбриотропного и мутагенного эффектов ксенобиотиков // В кн: 1-ый съезд токсикологов России. Тезисы докладов —М., —1988. —С. 308.
18 Сидорин Г.И, А.Д.Фролова, Л.В.Луковникова. Об "альтернативных" методах исследования в токсикологии // Там же. —С. 317.
19. Воронина А.К. Експериментальне обгрунтування зниження токсичності парацетомолу шляхом модуляції його метаболізму в печінці // Автореф. дис. ... канд. біол. наук. —Київ, 2001 —20 с.
20. Кокшарева Н.В. Механизм нейротоксичекского действия фосфорорганических и карбаматных пестицидов, обоснование основных принципов комплексной терапии отравлений // Автореф. дис. докт. биол. наук. —Киев, 1985. —24 с.
21. Методические рекомендации по гигиеническому нормированию лекарственных средств в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и воде водных объектов / Г.И. Рожнов, Л.Ф. Шашкина, В.А. Тройнова —М., 1999. —69 с.
22. Голубева М.И., Шашкина Л.Ф., Рожнов Г.И. и др. Система ускоренного гигиенического нормирования лекарственных средств в воздухе и перспективы ее развития // В кн: 1-ый съезд токсикологов России. Тезисы докладов. —М., 1998. —С. 41.
23. Методичні рекомендації по вивченню кумулятивних властивостей лікарських засобів при доклінічних дослідженнях / Трахтенберг І.М., Кокшарева Н.В., Шушуріна Н.О. —Київ.: МОЗ України, Державний фармакологічний центр, 2000. —8 с.
24. Каган Ю.С., Красовский Г.А., Штабский Б.М. Кумулятивные свойства химических соединений, их изучение и оценка // Токсикометрия химических веществ, загрязняющих среду. —Под ред.А.А. Каспарова и И.В. Саноцкого. —М.: Центр международных проектов ГКНТ, 1986. —С. 104—133.
25. Каган Ю.С., Б.М.Штабский. К проблеме молекулярных механизмов кумуляции (о 3-х типах кумулятивного действия токсических веществ) // Гиг. и сан. —1974. —N11. —С. 69-73.
26. Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. —М.: Медицина, 1975. —328 с.
27. Методичні рекомендації по доклінічному вивченню фармакокінетики лікарських засобів / М.Я. Головенко, І.С. Безверха, В.А. Жила та ін. —К.: МОЗ України, Фармакологічний комітет, 1995. —27 с.
28. Трахтенберг И.М. Количественные критерии трактовки нормы в связи с оценкой сдвигов и нарушений при воздействии пестицидов // Проблемы гигиены и токсикологии пестицидов. —Київ: Здоров'я, 1981. —Ч. 2. —С. 8—14.
29. Трахтенберг И.М., Тимофиевская Л.А., Квитковская Б.Я. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей. —Рига: "Зинатне", 1987. —171 с.
30. Трахтенберг И.М. Проблемы нормы в токсикологии. —М.: —Медицина, 1991. —243 с.
31. Верстакова О.Л., Рудаков А.Г., Гуськова Т.А. Оценка риска комбинированного применения лекарственных средств // В кн: 1-ый съезд токсикологов России. Тезисы докладов. —М., 1998. —С. 36.
32. Національний конгрес з біоетики (Київ 17—20 вересня 2001 р.) // Ж.АМН України. —2001. —Т. 7, №4. —С. 814—816.
33. Ципкун А.Г. Українсько-американський семінар з питань біоетики // Проблеми медицини. —2002. —№1—2. —С. 5—6.
34. Toxicology in vitro // An international jornal published in association with TNO BIBRA International LTD. —Pergamon. —2001. —V. 15, N3. —95 p.
35. Fentem J.H., Brigss D. A prevalidation study on in vitro tests for acute skin irritation —results and evalution by the Management Team // Toxicology in vitro. —An international jornal published in association with TNO BIBRA International LTD. —Pergamon, 2001. —V. 15, N1. —Р. 57—93.

| Зміст |