|
ЛІКАРСЬКА ТОКСИКОЛОГІЯ УДК 576.312.32.38:612.014.482 КОМПЛЕКСНОЕ ГЕНЕТИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБСЛЕДОВАНИЕ ЛИЦ, ПРИНИМАВШИХ БАД VAKORAIИ.В. Болтина*, Л.П. Петрашенко*, А.П. Кравчук, к.м.н.*, В.Ф. Демченко, к.х.н.**, Е.Р. Заец**, И.Н. Андрусишина**, Т.О. Кишко*, В.В. Вознюк* *Институт экогигиены и токсикологии им. Л.И. Медведя За годы независимости в Украине существенно расширился фармацевтический рынок: если в последние годы существования СССР Государственный реестр лекарственных препаратов составлял 3000 наименований (включительно с лекарственным сырьем), то сейчас только в Украине зарегистрировано около 6000 препаратов как отечественного, так и зарубежного производства, и тенденция к увеличению номенклатуры лекарственных препаратов растет. Все это требует усовершенствования системы всеобщего контроля над эффективностью и безопасностью фармакотерапии при применении уже зарегистрированных лекарственных форм и, особенно, лекарственных препаратов, находящихся на клиническом апробировании [1]. К сожалению, в современной практике клинического апробирования лекарственных форм, методология многоплановых исследований и комплексной оценки полученных данных до сих пор полностью не разработана. Как правило, отдельные специалисты занимаются оценкой одного узкого фактора, а генетико-токсикологические комплексные исследования при клинических испытаниях лекарственных препаратов не проводятся [2]. Кроме того, нет четких критериев по методологии скрининга химических мутагенов и оценки мутагенной активности и генетической безопасности применения препаратов, содержащих натуральные компоненты (травяные экстракты), которые в последнее время принято называть пищевыми добавками (БАДами). Целесообразность этих разработок основывается на наличии у растений таких свойств как противовоспалительное, седативное, общеукрепляющее и другие, а также отсутствии нежелательных побочных эффектов при их применении. Кроме того, БАДы могут иметь и антимутагенные свойства — это новое поле исследований, не имеющее сегодня устоявшейся методологии и представленное достаточно разрозненными данными [3-6]. Исходя из вышесказанного, целью нашей работы было проведение пилотных комплексных генетико-токсикологических исследований при проведении клинических испытаний биологически активной добавки (БАДа) VAKORAI (изготовитель Натур Продукт, Чехословакия), в состав которой входят: Zingiberis radix, Coriandri fructus, Malve folium, Majorane herba, Myristicae arillus. БАД рекомендуется фирмой разработчиком в качестве средства, оказывающего положительное влияние на потенцию у мужчин и достижение оргазма у женщин, и, кроме того, оказывающего обще тонизирующее действие на организм. Проведение клинического обследования Изучение биологической активности БАДа VAKORAI (изготовитель Натур Продукт) было проведено в амбулаторно-поликлинических и стационарных условиях клиники института экогигиены и токсикологии им. Л.И. Медведя. Проведены клинические наблюдения двух групп семейных пар: основной и контрольной — по 20 человек в каждой. Отбор лиц для основной группы осуществлялся путем их комплексного клинического обследования: на основе характерных жалоб, данных анамнеза (по специально разработанной схеме) и данных объективных методов исследования. Лицам основной и контрольной групп было предложено заполнить анкеты для определения степени проявления вегетативных нарушений (вегетативного индекса) и уровня преобладания тонуса симпатической и парасимпатической нервной системы (вегетативного статуса). Также было проведено изучение сексуальной дисгармонии и половых расстройств у семейных пар следующими методами: — Анкетного тестирования с помощью специально разработанного опросника — для определения психосоматических соотношений в состоянии сексуальных партнеров была оценена их медико-биологическая, психологическая и социальная совместимость. — Используя специализированный сексологический опросник составлены сексуальные формы для оценки половой функции мужчин и женщин (СФМ и СФЖ). — Изучение функционального состояния коры головного мозга и его изменение в результате приема VAKORAI проводилось путем оценки динамики общей работоспособности по таблице Анфимова. — Определение кратковременной зрительной памяти по Рыбакову. — Определение скорости переключения внимания по Шульте-Платонову. — Вычисление скорости решения простых арифметических примеров. — До начала назначения препарата и после окончания его приема лица основной и контрольной групп были осмотрены терапевтом и невропатологом, проведены морфологические исследования периферической крови, биохимическое исследование венозной крови. Для оценки лейкоцитарного состава крови проводили подсчет количества лейкоцитов и дифференцированный подсчет гемограмм по Папенгейму-Крюкову. В ходе биохимических исследований изучались особенности белкового, липидного и пигментного обменов, активность таких специфических ферментов как аланиламинотрансфераза, аспартат аминотрансфераза, маркеры воспалительных реакций. Лица основной группы получали препарат VAKORAI согласно предложенной фирмой-разработчиком схеме в течение трех недель. Лица контрольной группы препарат не получали. Исходя из данных таблицы, весьма показательна была динамика регресса таких жалоб как: изменчивость настроения в течении дня (уменьшилась с 90 до 50 %), рассеянность (уменьшилась с 60 до 25 %), раздражительность (уменьшилась с 70 до 25 %), беспричинное беспокойство (уменьшилось с 50 до 25 %), импульсивность поведения (уменьшилось с 45 до 10 %), головная боль (уменьшилась с 50 до 25 %). Незначительно уменьшилось количество таких жалоб как: неадекватная эрекция, недостаточное выделение влагалищной слизи, редкость наступления оргиастической разрядки, бледность кожных покровов, онемение, парастезии, зябкость кистей рук, сухость во рту, сердцебиение, нарушение аппетита, трудность межличностных контактов, хроническая усталость, общая слабость, забывчивость. Осталось прежним: повышенная сухость кожи, сниженная температура кистей рук — имеющих отношение в большей степени к стойкой психоневрологической и общесоматической патологии, которая требует применения длительной адекватной комплексной терапии и необходимости учета многокомпонентной этиологии и патогенеза сексуальных расстройств, учитывая и психо-социальные факторы. Проведенные исследования у лиц, находящихся под клиническим наблюдением, выявили улучшение показателей теста на скорость переключения внимания, характеризующего способность к сосредоточению (до приема препарата показатели составляли 48 с, 62 с, 3 мин 40 с; а после приема — 42 с, 51 с, 3 мин). Также положительной была динамика таких показателей как коэффициент продуктивности, отражающего общую работоспособность (увеличился с 39 до 43 %), и кратковременной зрительной памяти (количество допускаемых ошибок уменьшилось с 46 до32 %). Отмечено также незначительное улучшение результатов теста — решения простых арифметических примеров (время уменьшилось с 5,9 до 5,6 мин, количество допущенных ошибок с 60 до 30 %). Осмотры терапевта и невропатолога изменений состояния здоровья лиц после приема препарата не выявили. Исследования венозной крови у лиц основной группы до и после курса приема пепарата не выявили существенных изменений. Выводы относительно клинических испытаний препарата VAKORAI (изготовитель Натур Продукт) 1. Анализ содержание компонентов растительного происхождения продукции фирмы "Натур продукт"(Чехия) VAKORAI показал, что в данной фитокомпозиции преобладают пряно-вкусовые культуры, традиционно используемые в кулинарии, но в дозах ниже, чем в официально зарегистрированных фармакологических средствах и составляет менее 1 г. Указанные выше факты позволяют считать VAKORAI продуктом специального назначения (биологически активной добавкой). 2. В процессе потребления биологически активной добавки VAKORAI основной группой в количестве 20 человек побочных действий, включая аллергические реакции, лабораторными, клиническими и инструментальными методами не было выявлено. 3. Применение биологически активной добавки VAKORAI не привело к нарушениям показателей морфологического состава периферической крови, а также не выявило статистически достоверного влияния на биохимические показатели при исследовании венозной крови. 4. Отмечено положительное влияние БАДа на уменьшение основных жалоб (снижение полового влечения, рассеянность, быструю отвлекаемость, раздражительность, беспричинное беспокойство, изменчивость настроения в течения дня), а также некоторое улучшение показателей общей работоспособности, способности к сосредоточению, зрительной памяти после курсового приема. 5. Учитывая состав биологически активной добавки VAKORAI, активность ее компонентов и результаты клинического наблюдения за лицами ее употреблявшими, можно разрешить ее применение в качестве средства комплексной терапии сексуальных расстройств под контролем врача. Проведение генетико-токсикологических исследований Из числа добровольцев, которые принимали участие в клиническом испытании препарата, были отобраны 6 практически здоровых лиц (2 мужчин и 4 женщины в возрасте 25—28 лет), которые отрицали сознательный контакт с мутагенными и канцерогенными веществами, проживающих в городе Киеве и давших согласие на проведение дополнительных исследований. Были проведены исследования с помощью следующих методик до и после приема препарата: В крови — Уровень аберраций и спектр хромосом (с положительным контролем митомицином С в концентрации 10 мкг/мл) методом культивирования лимфоцитов периферической крови согласно общепринятому методу Хангерфорда на протяжении 52 часов [7] с модификациям — хромосомные аберрации являются крупными повреждениями хромосом и, следовательно ДНК, что может служить интегральным показателем суммарного действия разных мутагенных факторов на человека. — Содержание стойких хлорорганических пестицидов, их изомеров и метаболитов методом газожидкостной хромотографии [8] — доказано, что носительство ДДТ и его метаболита ДДЕ в организме уже является потенциальным фактором риска (в первую очередь это может вызывать нарушения в эндокринной системе); в центральной нервной системе найдены изомеры ГХЦГ и ДДТ. — Содержание тяжелых металлов свинца и кадмия методом пламенной атомно-абсорбционной спектрофотометрии [9] — действие на человека тяжелых металлов является токсичным; оно связано с нарушением нервной, сердечнно-сосудистой систем, заболеваниями желудочно-кишечного тракта. В моче — Мутагенность мочи — мочу вводили в объеме 0,1 мл (разведение культуральной смесью 1:40) в культуру лимфоцитов периферической крови донора при положительном контроле митомицине С [7] — основанием для разработки и использования данного теста послужили сведения о выделении с мочой из организма млекопитающих многих генетически активных соединений: ряда мутагенов прямого действия и активных метаболитов некоторых непрямых мутагенов. Определение мутагенности мочи — косвенное свидетельство генетической опасности химических факторов. — Мутагенный еффект с помощью теста Эймса без метаболической активации [10] — метод первичной оценки мутагенности вещества и ускоренный метод прогнозирования канцерогенности. — Содержание стойких хлорорганических пестицидов, их изомеров и метаболитов методом газожидкостной хромотографии [8]. — Содержание нитратов в биосубстратах [11] — канцерогенное действие нитратов связано с их возможным превращением в организме в нитрозоамины, которые могут вызывать мутации, приводящие к злокачественной трансформации клетки. Результаты представлены в таблицах 2 — 3. Анализируя данные табл. 2 показателей крови можно заметить следующие тенденции: — Уровень аберраций хромосом у лиц после приема препарата составляет в среднем 1,4+0,37 %, что статистически достоверно ниже, чем до приема препарата 2,6+0,38 % и не противоречит литературным данным о спонтанном уровне аберраций хромосом [12]. — Общее количество аберраций хромосом (и хромосомных и хроматидных) снижается после приема препарата. Количество хроматидных аберраций снижается с 19 до 10 (у всех лиц), количество хромосомных аберраций снижается незначительно с 9 до 7 (у всех лиц). — Частота аберраций хромосом при модификации митомицином С статистически не отличается до и после приема препарата и составляет 12,5+1,6 % и 13,1+1,5 %. — Содержания свинца снижается в среднем с 1,91 до 1,3 мкМ/л, то есть почти в полтора раза. Снижается содержание свинца у всех лиц без исключения (диапазон снижения у каждого индивидуально от 1,1 до 4,7 раз). — Содержание кадмия снижается в среднем с 0,18 до 0,10 мкМ/л, то есть почти в 2 раза (1,8 раза). Снижается также у всех лиц без исключения (диапазон снижения у каждого индивидуально от 1,8 до 3 раз). — Суммарное содержание хлорорганических пестицидов имеет также тенденцию к снижению после приема препарата Ваккарай. Оно снижается с 161,7 до 35,12 мкг/л, то есть в 4,5 раза, причем снижается у всех лиц без исключения (диапазон снижения у каждого индивидуально от 1,3 до 9 раз). — Содержание гексахлорбензола (ГХБ) падает от 6,9 до 0,52 мкг/л. Отмечается снижение этого показателя у всех лиц от 0,82 до 57,5 раз. — Суммарное содержание ДДТ снижается с 31,41 до 6,22 мкг/л (в 5 раз). Относительно изомеров (4,4 ДДЭ; 2,4 ДДД; 4,4 ДДД; 4,4 ДДТ) то все средние показатели имеют тенденцию к снижению. — Суммарное содержание гехсахлорциклогексана (ГХЦГ) снижается с 123,3 до 28,4 мкг/л (4,3 раза). Средние показатели изомеров (a ГХЦГ; g ГХЦГ; b ГХЦГ; d ГХЦГ) также имеют тенденцию к снижению. Итак, все средние показатели содержания хлорорганических пестицидов имеют тенденцию к снижению после приема препарата, хотя если рассматривать показатели каждого из добровольцев в отдельности, то такая закономерность наблюдается не у всех, у отдельных лиц некоторые показатели содержания хлорорганических пестицидов повышаются после приема препарата, но объяснения этому факту пока не найдено. В результате исследований показателей нативной мочи добровольцев (табл. 3), установлены следующие тенденции: — Содержание нитратов в субстрате после приема препарата существенно (в среднем в 5,3 раза) повышается с 31,7 до 169,4 мкг/мл, что может иметь тенденцию к большему выведению их из организма в результате усиления метаболического процесса. — Суммарное содержание хлорорганических пестицидов после приема препарата существенно (в среднем в 7 раз) повышается с 2,6 до 18,17 мкг/л, что также может свидетельствовать о наличии тенденции к усилению метаболических процессов. — При определении мутагенности мочи показатель аберраций хромосом статистически достоверно снижается с 6,25+1,13 % до 3,25+0,8 % при контроле 1,0+0,9 % и положительном контроле (митомицин в концентрации 10 мкг/мл) 20,0+4,0 %, что не противоречит литературным данным [13]. — Общее количество аберраций хромосом (и хромосомных и хроматидных) снижается после приема препарата. Количество хроматидных аберраций снижается с 25 до 13 (у всех лиц), количество хромосомных снижается с 5 до 0 (у всех лиц). — Мутагенность мочи, которая определялась с помощью теста Эймса, также снижается с 234,5 до 26 колоний на чашку. С целью определения эффективности использования тестов на мутагенность мочи, был рассчитан коэффициент корреляции между показателями теста Эймса и частотой аберраций хромосом в нативной моче лиц, принимавших препарат. Получены следующие результаты: На основе данных корреляционного анализа можно сделать вывод об использовании одного из тестов для определения мутагенности мочи, а именно менее долгосрочного — теста Эймса. Итак, в результате комплексных обследования добровольцев, принимавших препарат VAKORAI (изготовитель Натур Продукт), содержащий Zingiberis radix, Coriander fructose, Malve folium, Majorane herba, Myristicae arillus, установлены тенденции к снижению следующих показателей: частоты аберраций хромосом, содержания хлорорганических пестицидов и их метаболитов, тяжелых металлов в крови; снижению уровня мутагенности мочи (на основании двух тестов — Эймса и лимфоцитов периферической крови) и повышению уровня нитратов и суммарного содержания хлорорганических пестицидов в моче, что может свидетельствовать о выведении их из организма. Итак, на основании проведенных клинических испытаний и дополнительных исследований (цитогенетических, определения содержания ХОП, тяжелых металлов) можно сделать вывод, что наиболее показательными являются комплексные исследования препарата (БАДа), т.к. они отражают весь спектр влияния препарата на организм. Литература |