ИММУНОТОКСИЧНОСТЬ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ КАРКАСНЫХ СТРУКТУР, ОБЛАДАЮЩИХ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

В.Г. Аркадьев, к.м.н., С.Л. Рибалко, д.м.н., Н.А. Врынчану, к.б.н., Л.В. Новик

Институт фармакологии и токсикологии АМН Украины, г. Киев

Несмотря на определенные успехи в области профилактики и лечения вирусных инфекций, количество этих заболеваний не уменьшается. Так, в Украине смертность от данной патологии в 1997 г. в сравнении с 1990 г. увеличилась в 1,8 раза [1]. Среди болезней вирусной природы ведущее место занимают грипп и герпетическая инфекция. В связи с этим поиск и разработка новых эффективных лечебно-профилактических средств с антивирусной направленостью является актуальной задачей.

При гриппозной и герпетической инфекциях регистрируется снижение иммунологической реактивности организма, проявляющееся нарушениями как в гуморальном, так и клеточном звеньях иммунитета [9]. Дисбаланс в иммунной системе выражается в уменьшении числа СД 2 и увеличении относительного содержания СД 8-, СД 16-, СД 21-клеток, повышении количества активированных лимфоцитов, экспрессирующих антигены НLA-DR, рецепторы к интерлейкину-2, трансферрину, дисиммуноглобулонемии с гиперпродукцией IgM, снижении количества иммуноцитов, синтезирующих интерфероны, подавлении цитотоксической активности естественных киллеров [10]. Некоторые противовирусные лекарственные препараты (ремантадин, дейтифорин, 1-аминоадамантан) сами по себе проявляют ряд побочных иммунонегативных эффектов [8]. В связи с этим вновь разрабатываемые противовирусные средства должны не только обладать высокой специфической противовирусной активностью, но и не оказывать иммунотоксического действия.

В Институте органической химии АН Украины док. фарм. наук Г.И. Даниленко синтезирован ряд новых каркасных соединений, обладающих выраженными противовирусными свойствами. В настоящей работе представлены результаты исследований 10 новых соединений, производных фениладамантана (АВ-31, АВ-32), гидразидов (изо)никотиновой кислоты (АВ-6 — АВ-9), сополимера N-винилпирролидон-акриловая кислота (АВ-1) и его модификации дейтифорином (АВ-4), мидантаном (АВ-2), ремантадином (АВ-3). Названные соединения в процессе эксперимента проявили противовирусный эффект на моделях гриппа и герпеса [5-7].

Целью настоящей работы явилось экспериментальное изучение иммунотоксичности указанных выше соединений, как обязательного этапа изучения новых лекарственных средств. Исследования проводили на белых мышах, содержавшихся на обычном рационе вивария. В опытных и контрольных группах было не менее 10 животных.

Иммунотоксичность изучена на основных моделях гуморального и клеточного иммунитета: первичного гуморального ответа на Т-зависимый антиген, реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) и реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на Т- и В-митогены [2-4]. В качестве показателя неспецифической резистентности организма исследовали уровень интерферона.

Гуморальный иммунный ответ оценивали по титрам циркулирующих антител (гемолизинов и гемагглютининов). В качестве тимусзависимого антигена использовали эритроциты барана (ЭБ). Иммунизацию проводили внутрибрюшинным введением белым мышам оптимальной дозы ЭБ (108 клеток) в объеме 0,2 мл на 20 г массы тела. Оценку реакции проводили по титрам антител на 7-й день после иммунизации. При этом у животных регистрировали массу тела и лимфоидных органов (тимус, селезенка)

Воспроизведение реакции ГЗТ давало возможность исследовать влияние изучаемых препаратов на продукцию сенсибилизированными лимфоцитами медиаторов, вовлекающих клетки мононуклеарных фагоцитов в иммунный ответ и, таким образом, оценивать функциональную активность Т-системы иммунитета.

Для постановки РГЗТ белых мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением ЭБ в дозе 2•10⁵ клеток в объеме 0,5 мл на 20 г. Через 5 сут животным в подушечку задней левой лапки (опыт) вводили 108 ЭБ в объеме 0,02 мл, а в правую (контроль) вводили изотонический раствор натрия хлорида в том же объеме. Через 24 ч у животных измеряли массу подколенных лимфатических узлов. Реакцию оценивали по индексу реакции ГЗТ — отношению массы опытного лимфоузла к массе контрольного.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов на Т-и В-зависимые антигены конканавалин А (кон-А) и липополисахарид (ЛПС) проводили в опытах in vivo [2] с использованием подколенных лимфоузлов. Оценку реакции проводили через 5 сут и определяли по коэфициенту гипертрофии (отношение массы опытного лимфоузла к массе контрольного).

Изучаемые соединения вводили per os один раз в день, начиная с первого дня иммунизации. Разовая доза испытуемых соединений не превышала 0,1 ЛД₅₀. К каждой опытной группе был поставлен соответствующий контроль. Полученные результаты статистически обработаны. Данные опытов представлены в табл. 1.

Активность интерферона изучали in vitro по общепринятой методике угнетения цитопатогенного действия (ЦПД) вируса везикулярного стоматита (ВВС) в культуре клеток Л41 (лимфоидные клетки человека) и выражали в международных единицах МЕ/мл . Полученные результаты представлены в табл. 2.

Проведенные эксперименты показали, что изученные соединения при пероральном введении в разовых дозах, не превышающих 0,1 ЛД₅₀, не изменяют характер и интенсивность иммунных реакций как гуморального (процесс антителообразования), так и клеточного (РГЗТ, бласттрансформация лимфоцитов на митогены) звеньев, т.е., не проявляют иммунодепрессивного действия. Больше того, изучаемые соединения обладают иммуностимулирующими свойствами, что проявилось активацией синтеза интерферона.

Таким образом, наши исследования показали что впервые синтезированные соединения каркасной структуры в дозе 0,1 ЛД₅₀ не оказывают негативного влияния на функционирование гуморального и клеточного звеньев иммунитета, обладают интерферониндуцирующими свойствами. Это дает возможность предположить, что механизм их антивирусного действия обусловлен не только ингибированием вирусных ферментов, а и повышением неспецифической резистентности организма (усиление синтеза интерферона).

Литература
1. Здоров'я населення України та діяльність лікуквально-профілактичних закладів системи охорони здоров'я. Щорічна доповідь Міністра охорони здоров'я. 1998. —Київ, 1999. —С. 586.
2. Гюллинг Э.В., Самбур М.В. О воспроизведении и оценке реакции гиперчувствительности замедленного типа in vivo // Физиологический журнал. —1981. —Т. 27, вып. 2. —С. 237-240.
3. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. —М., 1984. —С. 9-10.
4. Зигль Э. Реакция гемагглютинации. Иммунологические методы. —М.: Мир, 1979. —С. 108-112.
5. Пошук нових противірусних засобів серед похідних норборнану та адамантану / Максимов Ю.М., Рибалко С.Л., Аркадьєв В.Г. та ін. // Ліки.-1998. —№3. —С. 58-59.
6. Вплив деяких похідних адамантану та норборнану на активність ДНК-полімерази клітин мозку мишей, інфікованих вірусом герпесу 1 типу / Нестерова Н.В., Рибалко С.Л., Даниленко Г.І., Максимов Ю.М. та ін. // Ліки. —1999. —№3. —С. 69-71.
7. Пошук інгібіторів ВІЛ та герпесу серед похідних каркасних сполук та піридинкарбонових кислот / Даниленко Г.І., Рибалко С.Л.,Максимов Ю.М. та ін. // Биополимеры и клетка. —1999. —Т. 15, №3. —С. 207-212.
8. Столяров З.Е., Лященко К.П. Аминопроизводные адамантана и иммунный ответ // Хим.-фарм. журнал. —1995. —№8 —С. 9-10.
9. Применение мефенамовой кислоты в терапии и профилактике осложненных и неосложненных форм гриппа в поликлиническом отделении и стационаре / Фролов А.Ф., Тринус Е.К., Руденко А.А., Дземан М.И. и др. // Химиотерапия и химиопрофилактика гриппа и ОРЗ.: Сб. науч. трудов. —Л., 1990. —С. 92-94.
10. Алкеева А.Б. Особенности иммунных нарушений при рецидивирующей вирусной инфекции Herpes simplex и сравнительная оценка эффективности различных методов терапии: Автореф. дис. … к. мед. наук. —М., 1992. —26 с.
11. Вивчення антивірусної дії потенційних лікарських засобів. Щербинська А.М., Дяченко Н.С., Рибалко С.Л., Носач Л.М., Дядюн С.Т., Вринчану Н.А. / Методичні рекомендації. —К., 2000. —40 с.

| Зміст |