УДК 615.212:535.379 +547.82.

АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ПИРИДИНКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ НА СЫВОРОТКУ КРОВИ КРЫС В УСЛОВИЯХ ИНТОКСИКАЦИИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОМ

Ю.И. Губский, чл.-кор. АМН Украины, Е.Л. Левицкий, д.м.н., А.Г. Горюшко, к.х.н., Т.Н. Курапова, А.Н. Марченко, к.б.н., В.Ф. Даниленко, к.х.н., М.Ф. Пасечник

Институт фармакологии и токсикологии АМН Украины, г. Киев

Известно, что компоненты крови (форменные элементы и плазма) являются "индикаторами" биохимических физиологических процессов в тех органах и тканях, откуда они поступают в кровоток. Стабильность состава и свойств компонентов крови — важнейшее условие гомеостаза, которое определяет состояние организма в целом и делает возможным применение множества диагностических тестов [1-4, 7].

Присутствие в крови легкоокисляющихся липидных образований (липопротеинов, холестерина, триглицеридов и фосфолипидов, как адсорбированных, так и входящих в состав мембран клеток крови) создает реальные условия сдвига окислительно-антиоксидантного равновесия в сторону активации окислительных процессов. Специализированные антиокислительные системы крови (восстановленный/окисленный глютатион, система аскорбиновой кислоты и т.д.) не только контролируют уровень окислительных процессов, но и обеспечивают поддержание и восполнение определенного антиоксидантного резерва, необходимого для своевременного предотвращения гиперактивации окислительных процессов, причиной которой могут быть самые разнообразные факторы (гипер- и гипоксия, гипер- и гипотермия, химическая интоксикация, ионизирующее излучение и т.д.) [5, 8]. Однако, в условиях, когда гиперактивация окислительных процессов обусловлена или весьма продолжительным, или достаточно мощным воздействием на организм экстремальных факторов, "антиокислительный резерв" постепенно исчерпывается. В этих условиях обычно применяют экзогенную стимуляцию и поддержание антиокислительного звена гемостаза организма — вводят недостающие или наиболее быстро расходуемые антиокислители, т.е. антиоксиданты [1, 3, 8, 9]. По мнению ряда авторов, применение в таких случаях синтетических антиоксидантов имеет определенные преимущества перед использованием антиоксидантов природного происхождения: синтетические более стабильны, характеризуются пролонгированным профилактическим и лечебным эффектом, способны индуцировать синтез ряда антиокислительных ферментов (глутатионпероксидаза (К.Ф. 1.11.1.9), глутатион-S-трансфераза (К.Ф. 2.5.1.18) и др.) [8, 11-15].

К числу синтетических антиоксидантов относятся многие фармакологические средства, которые, помимо их основного механизма действия, обладают и способностью ограничивать интенсивность окислительных процессов. Это противовирусные препараты, спазмолитики, кардиотропные лекарственные средства и т.д. [4, 8, 14-17, 21].

Ранее методом железоинициированной биохемилюминесценции (БХЛ) на модели липопротеинов яичного желтка показано, что некоторые нестероидные противовоспалительные средства — производные пиридинкарбоновых кислот — способны проявлять выраженные антиокислительные свойства [10, 18].

Цель настоящего исследования — изучение влияния нестероидных противовоспалительных веществ (НПВВ), производных пиридинкарбоновых кислот, амизона и вещества ПВ-4 на антиокислительный потенциал сыворотки крови.

В связи с этим нами было изучено влияние ФАВ амизона и вещества ПВ-4 на антиокислительные свойства сыворотки крови крыс в условиях in vitro и in vivo.

Материалы и методы исследования

В работе использовали отечественные реактивы квалификации "чда". Перекись водорода Н₂О₂ 3 % — из аптечной сети, амизон и ПВ-4, обладающие интерферогенными, жаропонижающими и анальгезирующими свойствами [19], разработаны в Институте фармакологии и токсикологии АМН Украины [20].

Исследования проводили на крысах-самцах линии Вистар трехмесячного возраста массой 150-200 г, которых содержали на стандартном рационе вивария и получали питье и пищу ad libitum.

Животные были разделены на четыре группы: 1 — интактные крысы (контроль), 2 — животные, отравленные тетрахлорметаном (ТХМ) (интоксикация), 3 и 4 — животные, отравленные ТХМ и после введения амизона и вещества ПВ-4. Крысам контрольной группы вводили 0,9 % изотонический раствор натрия хлорида внутрибрюшинно (в/б), животным 2, 3 и 4 групп вводили в/б гепатотропный яд CСl₄ в дозе 1,75 мг/кг массы тела, что соответствует ЛД₅₀. Животным 3 группы через 30 мин и 3 час после отравления ТХМ в/б вводили амизон в дозе 8,6 мг/кг, (1/40 ЛД₅₀) крысы 4 группы в эти же сроки получали в/б вещество ПВ-4 в дозе 51,5 мг/кг (1/10 ЛД₅₀).

Животных декапитировали через 24 час после введении ТХМ под легким эфирным наркозом. Кровь собирали в промаркированные пластмассовые пробирки, без антикоагулянта, центрифугировали при 2000 об/мин в течение 10 мин. Сыворотку осторожно переносили в заранее промаркированиые пробирки.

Антиокислительные свойства сыворотки крови изучали методом Н₂О₂-индуцированной биохемилюминесценции (БХЛ) [3, 22], для этого сыворотку разводили в соотношении 1:3 0,9 % раствором натрия хлорида, инкубировали при температуре 37°С в течение 10 мин, и затем на протяжении 1 мин при постоянном перемешивании регистрировали интенсивность спонтанного свечения. Водные растворы физиологически активных веществ (ФАВ) амизона и ПВ-4 добавляли к разбавленной сыворотке крови до введения инициатора Н₂О₂, инкубировали 5 мин, регистрировали интенсивность спонтанного свечения в течение 1 мин. После введения в среду инкубации Н₂О₂, конечная концентрация которого в пробах составляла 0,088 М (или 0,3 %) в течение 10 мин регистрировали параметры индуцированной БХЛ сыворотки крови.

В работе использовали центрифугу медицинскую ЦЛК-1 и биохемилюминометр БХЛ-06 с ФЭУ-79.

Статистическую обработку полученных данных производили с помощью микрокалькулятора "Электроника-Б3-34", используя t-критерий Стьюдента [23].

Результаты и обсуждение

В таблице приведены параметры Н₂О₂-индуцированной БХЛ сыворотки крови интактных (контроль) крыс (интенсивность медленной вспышки БХЛ — i₂ и площадь светосуммы реакции s), а также в присутствии амизона и вещества ПВ-4 в конечных концентрациях 10^-4, 10^-5, 10^-6, 10^-7 М. Как видно из полученных результатов, добавление in vitro к сыворотке крови интактных крыс амизона и вещества ПВ-4 не приводит к статистически достоверным изменениям параметров БХЛ, индуцированной Н₂О₂. Даже при малых конечных концентрациях ФАВ (10^-6 и 10^-7 М) при которых наблюдается максимальная антиокислительная активность ликопротеидах яичного желтка, регистрируется только тенденция к снижению интенсивности медленной вспышки БХЛ i₂ и площади светосуммы реакции s.

Наиболее удобной экспериментальной моделью гиперактивации процессов липопереокисления является отравление животных тетрахлорметаном [5, 6]. На рисунке (в % от контроля) приведены значения параметров Н2О2-инициированной БХЛ сыворотки крови интактных крыс (контроль), отравленных ТХМ (интоксикация), а также животных, отравленых ТХМ и получавших амизон или вещество ПВ-4. Из полученных результатов следует, что интоксикация ТХМ приводит к истощению антиокислительного звена прооксидантно-антиоксидантной системы сыворотки крови животных — статистически достоверно относительно контроля возрастают значения интенсивности медленной вспышки БХЛ — i₂ и площади светосуммы реакции s, (на 66,3 % и 28 % соответственно).

Введение отравленным ТХМ животным амизона или вещества ПВ-4 способствовало нормализации параметров индуцируемой Н₂О₂ БХЛ сыворотки крови: статистически достоверно (р<0,001) снижаются значения I₂ и площади светосуммы S. Причем, введение вещества ПВ-4 приводит к снижению значений параметра S фактически до контрольных значений — контроль 4601±145 усл.ед., ТХМ+ПВ-4 4868,9±100,0 усл.ед. (между значениями, полученными для сыворотки крови контрольных, т.е. интактных, крыс, и данными группы крыс, получавших ПВ-4, статистически достоверные различия отсутствуют).

Отсутствие статистически достоверных изменений приведенных параметров БХЛ при добавлении исследуемых веществ к сыворотке крови in vitro и выраженное влияние их на параметры БХЛ in vivo можно объяснить, предполагая наличие у амизона и ПВ-4 способности специфически взаимодействовать с белками-переносчиками крови. Как известно, одним из компонентов механизма действия НПВВ является влияние на транспортные свойства белков переносчиков, в частности сывороточного альбумина, путем вытеснения эндогенных стероидов с мест их связывания на молекулах протеинов, что существенно повышает уровень свободных эндогенных стероидов и тироксина (активных антиоксидантов), в крови [24-26].

Таким образом, проведенные исследования позволяют предположить, что в основе фармакологического действия амизона и вещество ПВ-4 лежат присущие им антиокислительные свойства — способность ингибировать процессы липопереокисления в крови.

Литература
1. Строев Е.В. Биологическая химия. —М.: Высшая школа, 1986. —479 с.
2. Гуляева Н.В. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. —1992. —№ 1. —С. 29-31.
3. Сидорик Е.П., Баглей Е.А., Данко М.И. Биохемилюминесценция при опухолевом процессе. —Киев: Наукова думка, 1989. —220с.
4. Дурнев А.Д., Середенин С.Б. // Хим.-фарм. журнал. —1990. —Т. 24, № 10. —С. 7-14.
5. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени. —К.: Здоров'я, 1989. —168 с.
6. Губский Ю.И., Долго-Сабуров В.Б., Храпак В.В. Химические катастрофы и экология.- К.: Здоров'я, 1993. —224 с.
7. Петрович Ю.М., Гуткин Д.В. // Пат. физиол. эксперим. терапия. —1986. —№ 5. —С. 85—92.
8. Барабой В.А., Сутковой Д.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и паталогии. —К.: Чернобыльинтеринформ, 1997. —340 с.
9. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. —Л.: Наука, 1985. —230с.
10. Губский Ю.И., Горюшко А.Г., Вистунова И.Е. и др. // Укр. биохим. журн. -1999. —Т. 71, № 5. —С. 85—89.
11. Mimica-Ducie N.M., Budineevie M.M., Mihajlovic B.A. // J. Serb. Chem. Soc. —1994. —V. 59, № 11. —P. 823—828.
12. Спасов А.А., Островский О.В., Ивахненко И.В. и др. // Эксперим. и клин. фармакол. —1999. -T. 62, № 1. —С. 8—40.
13. Костюк В.А., Потапович А.И., Сорока Н.Ф. // Вопр. мед. химии. —1990. —T. 36, № 3. —С. 37—39.
14. Насыров Х.М. // Фармакол. и токсикология —1987. —№ 6. —С. 113—116.
15. Ковалевский Е.И., Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О. и др. // Вестн. офтальмол. —1987. —T. 103, № 4. —С. 48—51.
16. Глушков Р.Г., Гуськова Т.А., Голиков П.П. и др. // Хим.-фарм. журн. —1996. —№ 1. —С. 3—5.
17. Савченкова Л.В., Даубач К.М. // Ліки —1996. —№ 4. —С. 122—126.
18. Губский Ю.І., Горюшко Г.Г., Курапова Т.М. та ін. // Ліки. —1999. —№ 3-4. —С. 55—59.
19. Бухтіарова Т.А. // Ліки. —1997. —№ 3. —С. 69—71.
20. Патент Украины № 6752 от 29.12.1994 г. "4-(N-бензил)-аминокарбонил-1-метилпиридиний йодид —обезболивающее средство с интерфероногенными, противовоспалительными и жаропонижающими свойствами" // Тринус Ф.П., Даниленко В.Ф., Бухтиарова Т.А., Рыбалко С.Л., Аркадьев В.Г., Клебанов Б.М., Максимов Ю.Н. и др. —"Промислова власність" —Бюлл. № 8-1. —29 грудня 1994 р.
21. Weglicky W.B., Mak I.T., Simic M.G. // J. Mol. Cell. Cardiol. —1990. —№ 10. —P. 1199—1208.
22. Серкиз Я.И., Чеботарев Е.Е., Барабой В.А.. Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии. —К.: Наукова думка, 1984. —184 с.
23. Ойвин И.А. // Патофизиол. и эксперим. терапия. —1960. —№ 4. —С. 76—85.
24. Чекман И.С. Биохимическая фармакодинамика.- К.: Здоров'я, 1991. —200 с.
25. Луйк А.И., Лукьянчук В.Д. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов. —М.: Медицина, 1984. —223 с.
26. Луйк А.И., Бравер-Чернобульская Б.С., Лукьянчук В.Д. // Биохимия. —1983. —№ 4. —С. 645-651.