|
ТОКСИКОЛОГИЯ ЛЕКАРСТВ УДК 612.118.24;536.615.241.2 ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВОЙ МАЗИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН "ПРОЛИДОКСИД" Украинская фармацевтическая академия, г. Харьков Состав и технология мази "Пролидоксид" были разработаны научными сотрудниками УкрФА на кафедре аптечной технологии лекарств под руководством проф. А.И. Тихонова. Мазь содержит субстанцию фенольного гидрофобного препарата прополиса (ФГПП), основными компонентами которой являются фенольные соединения. Установленные свойства субстанции ФГПП — противовоспалительные, антимикробные, репаративные, относительная безвредность как при пероральном, так и при внутрибрюшинном введении [1], а также недостаток отечественных репаративных средств, отвечающих современным требованиям, высокий уровень бытовых и производственных травм и удовлетворительные результаты применения прополиса при лечении ран и ожогов послужили основанием для создания ранозаживляющей мази "Пролидоксид". Введение в состав мази лидокаина обеспечило обезболивающее действие препарата, что важно при лечении ран и ожогов, а полиэтиленоксидная основа мази способствовала дегидратации гнойного содержимого раны. Доклиническое изучение фармакологической активности препарата позволило установить наличие выраженного антимикробного, противовоспалительного и ранозаживляющего действия [2]. Сейчас мазь "Пролидоксид" проходит ограниченные клинические испытания в качестве средства для местного лечения гнойных ран в І фазе раневого процесса, воспалительных инфильтратов, пролежней и ожогов легкой и средней степени. В нашей работе представлены результаты токсикологического изучения мази "Пролидоксид" — определение кожно-резорбтивного влияния при однократном и длительном накожном нанесении у животных, местнораздражающего и аллергизирующего действия. Все эксперименты были проведены на животных, выращенных в виварии ЦНИЛ УкрФА на полноценном рационе согласно установленным нормам [3]. Материалы и методы исследования Острую токсичность мази "Пролидоксид" при однократном накожном нанесении изучали на трех видах животных (крысы, мыши и кролики). Мазь наносили на выстриженный участок кожи, который для кролей составил 4х7,5 см, а для мышей и крыс — более 50 % от общей площади кожи в количестве 6 г/кг массы животного [4]. В течение 2-х нед проводили наблюдение за общим состоянием и поведением животных, их выживаемостью, потреблением пищи, кожным покровом, рефлекторной возбудимостью. С целью более полного выявления токсических свойств препарата, а также для определения среднесмертельных доз (ЛД50) острую токсичность мази "Пролидоксид" изучали при внутрижелудочном пути введения. Эксперимент проводили на белых нелинейных крысах массой 250–300 г с использованием методов [5, 6]. На протяжении 14 дней регистрировали клиническое состояние животных. Для выявления аллергизирующего действия мази "Пролидоксид" при наружном применении вызывали контактную сенсибилизацию животных. Эксперимент проводили на 12 морских свинках светлой масти массой 350–505 г, разделенных на две группы. Животным контрольной группы на выстриженный участок кожи размером 4х4 см наносили основу мази [7]. Второй, опытной группе животных наносили мазь "Пролидоксид". Через 10 и 20 дней накожной сенсибилизации проводили тестирование на участках интактной и скарифицированной кожи. В месте введения разрешающей дозы отмечали состояние кожи в 1-й час, а затем через 24 ч и выражали в баллах согласно методике. Кроме того, с целью оценки выраженности воспалительной реакции, до и после нанесения разрешающей дозы определяли температуру кожи и толщину кожной складки, а также подсчитывали количество лейкоцитов в периферической крови. В течение всего эксперимента наблюдали за массой животных и состоянием кожных покровов в месте нанесения мази. Изучение возможного местнораздражающего влияния мази "Пролидоксид" на слизистую оболочку проводили на трех кролях в соответствии с методическими указаниями [8]. Мазь наносили в количестве 50 мг в конъюнктивальный мешок правого глаза животных однократно и на 1 мин прижимали слезно-носовой канал у внутреннего угла глаза. Левый глаз служил контролем. Оценку повреждающего действия проводили по балльной шкале через 5, 15 мин, 1 ч, а затем ежедневно в течение 5-ти дней. Эксперименты по оценке кожно-резорбтивного действия мази "Пролидоксид" при длительном применении проводили на белых крысах с учетом половых различий. Мазь наносили на выстриженный участок кожи 2х2 см, что составляет 5 % от общей площади, в количестве 0,5 г на животное. Контролем служили группы животных, которым на выстриженный участок кожи размером 2х2 см наносили основу мази "Пролидоксид". Препарат и его основу наносили животным ежедневно в течение 1-го и 3-х месяцев, что обусловлено требованиями Фармкомитета [9]. Комплекс исследований дерматотоксического действия мази "Пролидоксид" включал измерение толщины кожной складки и влажности кожи. Для оценки степени повреждающего действия мази при ее проникновении через кожный барьер изучали влияние препарата на функциональное состояние органов и систем животных, оценку резорбтивного действия мази "Пролидоксид" проводили по изменению показателей периферической крови, функционального состояния печени и почек, коэффициентов массы внутренних органов, состояния центральной нервной и сердечно-сосудистой систем. Все изучаемые показатели исследовали в динамике до начала эксперимента, через 1 и 3 мес от начала нанесения мази. Белковосинтетическую функцию печени определяли по показателям общего белка сыворотки крови и белковых фракций, учитывали также время свертывания крови, содержание фибриногена и протромбиновое время. О ферментосинтетической функции печени судили по активности аланин- и аспартатаминотрансфераз, церулоплазмина. Экскреторную функцию печени оценивали с помощью бромсульфалеиновой пробы. Для определения состояния монооксигеназной системы печени использовали медикаментозный сон. Состояние углеводного и липидного обмена в печени оценивали по количеству глюкозы, холестерина и общих липидов в крови. Для оценки функционального состояния почек определяли относительную плотность мочи, хлориды и мочевину сыворотки крови и мочи, ЦНС — использовали интегральный тест "открытое поле". Функциональное состояние сердца оценивали по показателям ЭКГ на аппарате ЭКГТ-ОЗМ при скорости движения ленты 50 мм/с. По окончании исследований животных декапитировали, их внутренние органы (печень, почки, сердце, легкие, селезенку, надпочечники, семенники) подвергали микроскопическому и гистологическому исследованию с окраской гематоксилин-эозином. В ходе проведения биохимических исследований использовали тест-системы фирмы "Lachema" (Чехия). Весь фактический материал обработан методами вариационной статистики с использованием коэффициента Стьюдента [10]. Результаты и их обсуждение Результаты изучения острой токсичности мази "Пролидоксид" при однократном накожном нанесении крысам, мышам и кроликам свидетельствуют об отсутствии проявлений интоксикации у животных. В течение двухнедельного наблюдения все животные имели нормальный аппетит, гладкий и пушистый шерстный покров, их поведение не изменялось. При внутрижелудочном введении мази "Пролидоксид" крысам ЛД50 по методу Т.В.Пастушенко составила 13800 мг/кг с доверительным интервалом 9200–18300 мг/кг, по методу В.Б. Прозоровского — 12580,0±1271,7 мг/кг. Согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76, мазь "Пролидоксид" при внутрижелудочном пути введения является малоопасной (IV класс). При изучении аллергизирующего действия препарата через 10 и 20 дней накожных аппликаций каких-либо видимых изменений в виде гиперемии, инфильтрации, шелушения не возникало. В течение всего эксперимента морские свинки были подвижными и активными. Масса животных к концу опыта соответствовала возрастной физиологической норме. Введение разрешающей дозы препарата на 20-й день сенсибилизации на неповрежденную и скарифицированную кожу не вызвало явлений гиперемии у морских свинок как в опыте, так и в контроле. Температура кожи, число лейкоцитов в периферической крови и толщина кожной складки на 21-й день соответствовали таковым в контроле. Следовательно, мазь "Пролидоксид" не обладает аллергизирующим действием. При изучении возможного местнораздражающего влияния мази "Пролидоксид" не выявлено видимой реакции со стороны слизистой оболочки глаза кроликов, что свидетельствует об отсутствии ирритативного действия препарата. На протяжении всего периода изучения хронической токсичности мази "Пролидоксид" животные имели гладкий шерстный покров, нормальный аппетит, равномерно увеличивали массу тела. Животные по внешнему виду, поведению и отношению к пище не отличались от контрольных. Весовые коэффициенты внутренних органов крыс соответствовали таковым в контроле. Не зарегистрировано существенных изменений в картине красной и белой крови, что свидетельствует об отсутствии влияния мази "Пролидоксид" на систему кроветворения. Комплекс исследований функционального состояния печени позволил установить достоверные изменения показателей в зависимости от пола животных. Так, у крыс-самцов наблюдалось снижение уровня аланинаминотрансферазы после первого месяца применения мази и снижение длительности медикаментозного сна сравнительно с контролем на обоих сроках исследования (табл. 1). У крыс-самок отмечена тенденция к снижению уровня церулоплазмина. Однако, эти изменения не выходят за пределы физиологических колебаний и не могут служить признаком токсического воздействия препарата. При изучении экскреторной функции печени, как у самцов, так и у самок установлено недостоверное, но стабильное уменьшение времени экскреции БСФ (табл. 1). Рассматривая этот показатель вместе с уменьшением длительности медикаментозного сна у самцов, можно полагать, что мазь хорошо проникает через кожу и оказывает некоторое влияние на процессы биотрансформации в печени. Не выявлено отрицательного влияния изучаемого препарата на экскреторную функцию печени, показатели белкового обмена. В результате длительного применения мази "Пролидоксид" достоверно увеличилась длительность времени свертывания крови у крыс-самок. Однако указанное изменение не выходит за пределы физиологических колебаний данного показателя. У крыс-самок выявлено достоверное повышение уровня холестерина после 3 мес применения изучаемой мази (табл. 2), но данное изменение характеризует вариабельность нормы и не может рассматриваться как признак нарушения функции печени. Возможно, что увеличение синтеза холестерина является одним из механизмов репаративного действия мази, так как холестерин входит в структуру клеточных мембран. На протяжении всего эксперимента не было выявлено изменений показателей, которые характеризуют концентрационную, реабсорбционную и азотовыделительную функции почек. Изучение поведенческих реакций животных в интегральном тесте "открытое поле" позволило выявить тенденцию к некоторым половым различиям в чувствительности крыс к препарату. Так, у самцов после первого месяца применения мази "Пролидоксид" отмечено достоверное снижение эмоциональной реактивности, а также ориентировочно-исследовательской активности после трех месяцев применения препарата. На интегральном показателе эти отклонения не отразились, что свидетельствует об отсутствии существенного влияния мази "Пролидоксид" на функциональное состояние ЦНС. У самцов после третьего месяца эксперимента выявлена тенденция к увеличению вольтажа зубца Р. У самок после первого месяца применения мази, напротив, наблюдалась тенденция к снижению вольтажа зубца Р по сравнению с контролем. Однако, эти отклонения сопоставимы с динамикой показателей в контроле. Отсутствие дерматотоксического эффекта мази "Пролидоксид" подтвердили показатели толщины кожной складки и влажности кожи, которые находились в пределах контрольных величин. Анализ гистоструктуры внутренних органов и кожи крыс показал, что аппликации мази "Пролидоксид" как на протяжении одного, так и 3 мес не вызывают каких-либо нарушений. Выводы 1. Мазь "Пролидоксид" является практически нетоксичной при пероральном введении крысам и не проявляет токсических свойств при однократном накожном нанесении на трех видах животных (мыши, крысы и кролики). 2. Исследуемый препарат не проявляет местнораздражающего и аллергизирующего действия. 3. При длительном накожном нанесении мазь "Пролидоксид" не оказывает дерматотоксического эффекта и не нарушает функции жизненно важных органов и систем крыс. Литература |