|
ТОКСИКОЛОГИЯ ЛЕКАРСТВ УДК 615.9; 611-013.9; 591.3; 612.64; 611-012 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭМБРИОТОКСИЧЕСКОГО И ТЕРАТОГЕННОГО ЭФФЕКТА ПОТЕНЦИАЛЬНОГО АНАЛЬГЕТИКА Д-57 Т.А. Бухтиарова, д.м.н., В.С. Хоменко, к.м.н., А.В. Матвиенко, к.м.н., Т.В. Шатыркина Институт фармакологии и токсикологии АМН Украины, г. Киев Для борьбы с болью наиболее широкое применение нашли анальгезирующие средства (опиоидные и неопиоидные анальгетики). Известные анальгетики не полностью удовлетворяют запросы современной клиники вследствие присущих им недостатков. Так, опиоидные анальгетики вызывают привыкание и пристрастие [2], а применение неопиоидных анальгетиков может сопровождаться развитием ряда побочных эффектов [1, 3–5]. Поэтому проблема изыскания новых эффективных неопиоидных анальгетиков, лишенных побочных эффектов, является актуальной. В отделе фармакологии противовоспалительных и анальгезирующих средств изучен потенциальный неопиоидный анальгетик Д-57 (производное пирроло-имидазола). Материалы и методы исследований Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств веществ проводили в соответствии с методическими рекомендациями [6, 7]. Эксперименты выполнены на белых нелинейных крысах массой 180–200 г с датированным сроком начала беременности. Первым днем беременности считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищных мазках самок. Вещество Д-57 вводили самкам внутрижелудочно через зонд. Доза вещества для животных опытных групп составляла 9 мг/кг массы тела. Препарат растворяли в 0,1 мл 96 % спирта с добавлением 0,1 мл твина-80 и доводили до 5 мл водой для инъекций. Необходимая доза вещества содержалась в растворе, вводимом из расчета 0,1 мл/кг. В качестве контроля использовали интактных животных, находящихся на обычном водном режиме и пищевом рационе. Применяли следующую схему введения вещества: с первого по шестой день беременности (ежедневно); с шестого по девятнадцатый (ежедневно) и с первого по девятнадцатый день беременности (ежедневно). Для установления возможного эмбриотоксического действия, проявляющегося в постнатальном периоде жизни, животным с первого по пятнадцатый день беременности Д-57 вводили в эффективной дозе. Беременных крыс содержали в отдельных клетках, обеспечив их необходимой подстилкой для устройства гнезда. С первого дня беременности за животными устанавливали наблюдение. Контролировали состояние и поведение самок, регистрировали динамику изменения массы тела, продолжительность беременности, течение родов. Если животные погибали, то проводили их вскрытие и оценивали эмбриональный материал. Параллельно вели наблюдение за контрольной и интактной группами животных. Учет результатов эксперимента проводили как при забое беременных самок на 20-й день беременности, так и по состоянию потомства в постнатальный период развития. После эвтаназии взрослых крыс путем дислокации шейных позвонков на вскрытии в яичках подсчитывали количество желтых тел, в матке — места имплантации, число живых и погибших зародышей. Учитывали также состояние плаценты. Эмбриональный материал внимательно осматривали, оценивали анатомическое строение плодов, определяли массу плодов и кранио — каудальные размеры. Показателями эмбриотоксического действия Д-57 считали: Предимплантационную эмбриональную смертность рассчитывали по разнице между количеством желтых тел и количеством мест имплантации в матке. Постимплантационную гибель определяли по разнице между числом имплантаций и числом живых плодов. Изучали также общую эмбриональную смертность, размер помета, выход живых плодов. Тератогенный эффект вещества отмечали в начале визуально — во время вскрытия беременных самок. Затем часть плодов (2/3 от общего числа плодов в опыте) фиксировали в 95 % этиловом спирте для последующей оценки состояния костной системы на просветленных веществах, окрашенных ализарином по методу Даусона. Остальные плоды опускали в жидкость Бауэна для микроанатомического анализа по методу Вильсона. Новорожденных крысят осматривали, регистрировали кранио-каудальные размеры, определяли массу тела. Учитывали случаи гибели крысят от момента рождения до прекращения вскармливания. При этом вычисляли индекс постнатальной гибели. Проводили наблюдение за физическим развитием крысят: в динамике раз в неделю регистрировали прирост массы и длины тела, определяли такие показатели развития, как отлипание ушной раковины, появление первичного и постоянного шерстного покрова, прорезывание резцов, открывание глаз. На 30-е сутки после рождения крысят умерщвляли при помощи дислокации шейных позвонков и проводили гистологическое исследование внутренних органов [9]. Цифровой материал подвергали статистической обработке с определением критерия Стьюдента. Устанавливали достоверность различия между исследуемыми показателями у потомства от интактных животных; от крыс, получавших растворитель, и от животных, которым вводили Д-57 (при 95 % достоверности [8]). При расчете достоверности различия процентных величин использовали формулу: ±m = Vp(100-p)/n, где: m — средняя ошибка среднего арифметического; Результаты и их обсуждения Эксперименты свидетельствуют, что эмбриональная гибель (табл. 1) у животных опытной и контрольной групп не отличалась от таковой в норме. Также не регистрировалась смертность самок после беременности. По результатам исследования массы и кранио — каудальных размеров плодов и плаценты животных опытной и контрольной групп достоверных различий не отмечалось. Как видно из табл. 2, введение вещества в изучаемой дозе беременным самкам не приводило к отставанию в развитии плода и плаценты. При обследовании извлеченных плодов во всех группах не выявлено наличия внешних аномалий развития лицевого и мозгового черепа, глаз, ушных раковин, передней брюшной стенки, конечностей, хвоста. Не установлено нарушений топографии крупных сосудов (артерий и вен), сердца, легких, органов брюшной полости. На уровне лицевого и мозгового черепа отмечалась симметричность расположения анатомических структур нижней челюсти, переднего отдела твердого неба, носовой полости, глазных яблок и обонятельных луковиц, больших полушарий головного мозга, мозжечка и продолговатого мозга. На фронтальных срезах у опытных и контрольных объектов определялась идентичность топографии гортани, пищевода, слюнных желез, трахеи, спинного мозга, крупных сосудов, сердца, легких, бронхов, печени, желудка, всех отделов тонкого и толстого кишечника, поджелудочной железы, почек, надпочечников, органов малого таза. Дефектов скелета также не обнаружено. Изучение эмбриотоксического действия, проявляющегося в постнатальном периоде развития крыс, было начато с общих наблюдений за течением беременности у самок, регистрации прироста массы тела животных на протяжении беременности. Самки были активными без признаков каких-либо нарушений. Из 12-ти животных, отобранных для эксперимента, 3 самки с датированным сроком осеменения, помета не дали, прироста массы тела у них не наблюдалось, остальные самки родили крысят. Среднее количество крысят в контрольной и опытных группах крыс, получавших вещество Д-57 в дозе 9 мг/кг, не отличалось от такового в норме (интактные животные). Масса и кранио-каудальные размеры родившихся крысят соответствовали норме (табл.3). Большое значение для характеристики эмбриотоксического действия препарата имеют данные о смертности крысят в начале постнатального периода жизни. Как видно из табл. 4, в опытной группе животных в первую неделю погибло несколько больше крысят, чем в экспериментах с введением растворителя, однако по сравнению с интактным контролем эта величина оказалась не достоверной. В течении второй недели после родов в опыте наблюдалась такая же гибель крысят, как в норме. Таким образом, проведенные на нелинейных вергильных белых крысах исследования не выявили внешних и внутренних аномалий, неправильностей формирования зародышевых тканей, признаков эмбриотоксического и тератогенного действия Д-57 на потомство, рожденное от крыс, получавших его в дозе 9 мг/кг внутрижелудочно на всем протяжении и в различные сроки беременности. Литература |